Иммуноглобулины IgA, IgM, IgG (венозная кровь) в Москве

Анализ на иммуноглобулины класса G к спайковому (S) белку SARS CoV-2 позволяет определить уровень иммунной защиты к вирусу. Такое исследование целесообразно выполнять после вакцинации.

В связи с распространением коронавирусной инфекции COVID-19, отдельное внимание уделяется не только лечению, но и своевременному выявлению. Большинство медицинских учреждений начали тестирование с применения метода ПЦР (полимеразная цепная реакция). Он направлен на выявление вирусной РНК в эпителии верхних дыхательных путей. То есть, если человек уже переболел коронавирусной инфекцией, то результат ПЦР окажется отрицательным.

Далее диагностика COVID-19 стала проводиться с применением иммуноферментного анализа (ИФА). В отличие от ПЦР, ИФА позволяет выявить специфические антитела в крови. Отсюда вытекает одно важное преимущество метода. С его помощью можно выявить не только активные формы болезни, но и определить, переболел человек коронавирусом или нет.

Подробное описание исследования

Иммуноглобулины (Ig, антитела) — это белки сыворотки крови, которые являются факторами гуморального иммунитета. Этот подтип иммунной системы защищает организм человека от различных внеклеточных микроорганизмов (преимущественно бактерий, гельминтов) и их токсинов.

Иммуноглобулины имеют общий план строения, однако отличаются друг от друга некоторыми структурными участками. На основании этого выделяют пять классов иммуноглобулинов: M (IgM), G (IgG), A (IgA), E (IgE) и D (IgD). Данный лабораторный анализ направлен на определение концентрации в крови иммуноглобулинов IgA, IgM и IgG.

Иммуноглобулины IgA преимущественно представлены в секретах железистых органов: в слюне, пищеварительном соке, выделениях слизистой носа и молочной железы. В крови содержание данных антител ограничивается в диапазоне 10-15 % от общего количества всех иммуноглобулинов.

Одной из ключевых функций иммуноглобулинов класса A является первая линия защиты организма на поверхностях слизистых оболочек. IgA препятствуют проникновению различных микроорганизмов и их продуктов жизнедеятельности. Несмотря на то, что IgA не обладают бактерицидной активностью, они играют важную роль в нейтрализации бактериальных токсинов. Также известно, что иммуноглобулины A обширно представлены в молозиве (грудном молоке) и могут обеспечивать специфическую иммунную защиту новорожденного от различных инфекций.

Иммуноглобулины класса M имеют сложное строение и наибольшую молекулярную массу. В связи с этим антитела IgM не могут во время беременности передаваться (через плацентарный барьер) от организма матери к плоду.

IgM выполняют одну из ведущих функций в иммунной защите, они являются наиболее ранними антителами, которые вырабатываются в ответ на попадание чужеродных молекул (антигенов). Иммуноглобулины М могут участвовать в нейтрализации антигенов самостоятельно, а также в составе сложного иммунного комплекса — системы комплемента. Наибольшая активность IgM проявляется против множества бактерий — возбудителей пневмонии, менингита, гемофильной инфекции и других.

Антитела IgG являются доминирующим классом по количеству молекул в сыворотке крови – на их долю приходится 75-80 % от всех иммуноглобулинов. IgG преимущественно вырабатываются после антител IgM в период вторичного иммунного ответа (при повторном попадании чужеродной молекулы в организм). Это свойство обуславливает одну из особенностей IgG — данные антитела способствуют долговременной иммунной защите организма от различных бактерий, вирусов, гельминтов, простейших и продуктов их жизнедеятельности.

Ввиду своего небольшого размера IgG являются единственными иммуноглобулинами, которые могут проходить через плацентарный барьер в период беременности. Их считают основными антителами, которые обеспечивают иммунитет новорожденного ребенка на протяжении первых 3-6 месяцев его жизни.

Основные патологии с иммуноглобулинами класса A, M и G связаны с нарушением их количества. Недостаток данных антител зачастую связан с иммунодефицитом, который может иметь различное происхождение. Дефицит IgA, IgM и IgG может сопровождаться появлением или обострением инфекционных заболеваний (дыхательных путей, ЛОР-органов и др.); аутоиммунных (ревматоидный артрит, системная красная волчанка и др.) и аллергических патологий (ринит, астма и пр.).

Причинами избытка антител класса IgA, IgM и IgG чаще всего выступают острые или рецидивирующие воспалительные заболевания (инфекционной и неинфекционной природы), а также онкогематологические патологии, связанные с опухолевым перерождением B-лимфоцитов и бесконтрольным образованием иммуноглобулинов одного или нескольких классов.

Данный лабораторный анализ рекомендуется сдавать пациентам для оценки гуморального звена иммунной системы в рамках диагностики (острых/хронических) инфекционных, аутоиммунных, гематологических и онкологических заболеваний, а также иммунодефицитного состояния. В лаборатории «Гемотест» Вы также можете дополнительно пройти комплексное исследование гуморального иммунитета.

Подробное описание исследований, референсные значения представлены на страницах с описаниями отдельных исследований.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

1. Стадия узнавания исследуемого соединения специфическим антителом;
2. Стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
3. Стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

В реакции участвуют:

• Твердая фаза;
• АГ и АТ;
• Конъюгат (антиген или антитело, меченые ферментом);
• Ферментный маркер;
• Субстрат;
• Стоп-реагент (чаще всего применяют серную кислоту).

Твердая фаза

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Антигены и антитела

АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант. Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2). Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.

Субстраты

Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.

• Для ПХ в качестве субстрата используют 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ хромоген). Происходит цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанного определяемого вещества;
• Для ЩФ субстратом является 4-нитрофенилфосфат;
• β-D-галактозидаза катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы.

Классификация ИФА

В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

• В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментом и конкурирующий за центры специфического связывания с ним;
• Для неконкурентных методов характерно присутствие на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания.

2 — по принципу определения исследуемого вещества:

• Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ). Используют антитела к исследуемому веществу, соединенные со специфической меткой. В этом случае метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу;

• Непрямое определение концентрации вещества – по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала.

3 — по типу результатов:

• Количественный;
• Полуколичественный;
• Качественный.

Конкурентный ИФА

1. На твердой фазе иммобилизованы специфические моноклональные антитела;
2. В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный ферментом, и исследуемый образец. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для построения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях. Проводят инкубацию и отмывку;
3. Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
4. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества обратно пропорциональна оптической плотности.

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

1. На твердой фазе иммобилизованы моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела;
2. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положительный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различных разведениях. Инкубируют и отмывают;
3. В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела —конъюгат. После инкубации проводят отмывку для удаления несвязавшихся антител;
4. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
5. Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна оптической плотности.

Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза. Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

Образцы рассматриваются как:

• положительные, если отношение более 1,1;
• сомнительные, если отношение 0,9–1,1;
• отрицательные, если отношение менее 0,9.

Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.

Методом ИФА определяют:

• Гормоны;
• Онкомаркеры;
• Антитела (IgG, IgM) к возбудителям заболеваний — ToRCH-инфекций, туберкулеза, сифилиса, к вирусу гепатита С (ат ВГС), микоплазме, хламидиям, лямблиям, Helicobacter pylori и др.;
• Антигены вирусов —гепатит D, Е, А (ВГD, ВГЕ, ВГА), гепатит С (ВГСсore), гепатит В (НВs, НВе НВсore);
• Аутоиммунные заболевания.

Источники:

1. Лекции по лабораторной диагностике, СибГМУ, 2015 г.;
2. https://www.bosterbio.com/protocol-and-troubleshooting/elisa-principle.

Что ещё назначают с этим исследованием?

Гуморальный иммунитет (иммуноглобулины IgA, IgM, IgG, IgE, циркулирующие иммунокомплексы, компоненты комплемента С3, С4)

17.51. Вен. кровь 8 дней

3 890 ₽ Добавить В корзину

Иммунный статус (скрининг) (Фагоцитарная активность лейкоцитов, клеточный иммунитет, иммуноглобулин IgE общий, иммуноглобулины IgA, IgM, IgG)

27.960. Вен. кровь 3 дня

7 640 ₽ Добавить В корзину

Иммуноглобулин IgE общий

17.2. Вен. кровь 1 день

670 ₽ Добавить В корзину

Клеточный иммунитет (Т-лимфоциты, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, Иммунорегуляторный индекс, B-лимфоциты, NK-T-клетки, NK-клетки, Лейкоцитарная формула)

17.50. Вен. кровь 3 дня

5 200 ₽ Добавить В корзину

Типирование парапротеина в сыворотке крови с помощью иммунофиксации

50.28.2181 Вен. кровь 14 дней

3 720 ₽ Добавить В корзину

Стоимость исследования

Клиника «ПрофМедЛаб» предлагает несколько видов тестов на антитела к COVID-19:

• Количественное определение иммуноглобулинов класса G. Анализ позволяет понять, переболел ли человек коронавирусной инфекцией или нет. Материал для исследования — венозная кровь. Сроки — 24 часа.
• Количественное определение иммуноглобулинов класса G и М. Мы рекомендуем сочетать его с ПЦР с целью получения максимально объективной информации. Материал для исследования — венозная кровь. Сроки — 2–3 дня.
• Экспресс тест SARS-CoV-2 Antibody Test. Можно провести самостоятельно в домашних условиях или у нас в клинике, после чего проконсультироваться с врачом. Материал для исследования — капиллярная кровь (из пальца). Результат будет готов через 20 минут.

Срок готовности исследования — от 1 дня с момента забора материала. Цены на эти и другие виды анализов представлены в таблице:

Использованная литература

1. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / под ред. Н.У. Тица. — М. : Лабинформ, 1997. — С. 213-215, 223-226.
2. JVaillant, A., Jamal, Z., Ramphul, K. Immunoglobulin. In: StatPearls, 2021.
3. Sathe, A., Cusick, J. Biochemistry, Immunoglobulin M. StatPearls Publishing, 2021.
4. Гистология (введение в патологию) / под ред. Э.Г. Улумбекова, Ю.А. Челышева. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 1997. — С. 528 – 530.
5. Kumar, V., Abbas, A., Fausto, N. et al. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease, 2014. — 1464 p.

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG — это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов — хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.

Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита.

Суммарные антитела к Treponema pallidum: расшифровка

Положительная реакция на антитела к бледной трепонеме указывает на разные клинические стадии сифилиса (первичный, вторичный, латентный). Также положительный результат анализа на суммарные антитела к Treponema pallidum может сохраняться некоторое время после курса лечения сифилиса («серологический шрам»).

Результат анализа отрицательный при отсутствии инфекции или при раннем первичном сифилисе.

Тест на суммарные антитела к Treponema pallidum может иметь сомнительный результат. Тогда проводится повторный анализ на суммарные антитела спустя пару недель.

Анализ на антитела в диагностике TORCH-инфекций

Аббревиатура TORCH появилась в 70-х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.

Анализ крови на TORCH инфекции является комплексным исследованием, в его состав входит 8 тестов:

— Определение антител к вирусу простого герпеса 1,2 типа IgM и IgG

— Определение антител к цитомегаловирусу IgM и IgG

— Определение антител к вирусу краснухи IgM и IgG

— Определение антител к Toxoplasma gondii IgM и IgG

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности (наличие в крови только антител IgM) является показанием для ее прерывания.

Антитела IgM

Их концентрация повышается вскоре после заболевания. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения. Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике гепатита А и детских инфекций (краснуха, коклюш, ветрянка), легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего.

Подготовка к тесту:

Никакой специальной подготовки не требуется (сдавать кровь натощак не обязательно, курить можно). Анализ к коронавирусу можно сдать в течение дня, не ранее чем через 3 часа после приема пищи. У человека, который сдает тесты для определения наличия антител к коронавирусу Covid-19, не должно быть клинических проявлений инфекционного заболевания: повышенной температуры, кашля, насморка, мышечных болей. Если выявлены симптомы Covid-19, просим вас сообщить об этом администратору до визита в клинику и сдачи анализа. Забор анализа не производится в случае нахождения пациента на самоизоляции по заболеванию.

Расшифровка анализа на сифилис RPR

Положительная реакция теста появляется обычно на 3-5 неделе после заражения или спустя неделю после появления первичного шанкра на теле.

Анализ бывает положительным также в течение года после излечения сифилиса и при некоторых других заболеваниях (антифосфолипидный синдром). При проведении анализа в динамике титр антител RPR уменьшается. При полном излечении сифилиса RPR-анализ в 98% случаев становится отрицательным.

Если анализ на сифилис RPR впервые оказался положительным, то следующим шагом для подтверждения инфекции будет анализ на суммарные антитела к Treponema pallidum.

Ложноположительный результат анализа можно встретить при беременности, туберкулёзе, онкологии, сахарном диабете, подагре, пневмонии и аутоиммунных заболеваниях, а также при наличии в организме других видов трепонем, наркомании, вирусном гепатите и др.

Отрицательный результат анализа не может исключить полностью поздний третичный и ранний первичный сифилис.